ELISA實(shí)驗(yàn)設(shè)置
ELISA實(shí)驗(yàn)設(shè)置
預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置
1、酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是基于抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的高效催化反應(yīng)而建立的一種生物分析技術(shù)，可用于對(duì)待測(cè)樣本中目的蛋白進(jìn)行定性、定量分析。常見的待測(cè)樣本為血清、血漿。
2、對(duì)于一個(gè)完整的 ELISA kits，內(nèi)包含所有試劑，其相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)操作直接參考說明書即可。對(duì)于第一次接觸 ELISA實(shí)驗(yàn)而言，預(yù)實(shí)驗(yàn)是一個(gè)不錯(cuò)的選擇；而對(duì)于待測(cè)樣本而言，預(yù)實(shí)驗(yàn)可以實(shí)現(xiàn)樣本的初步判斷，比如樣本是否需要稀釋等。
3、那么如何做好預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?
3.1 首先需按說明書制備好樣本；若說明書沒提及，則需查找相應(yīng)的樣本處理方法；
3.2 所有用到的試劑要按說明書要求配制或準(zhǔn)備，預(yù)實(shí)驗(yàn)一般設(shè)置2條帶（16孔），操作步驟請(qǐng)參考說明書，酶標(biāo)板具體設(shè)置如下：
以 Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit 為例，標(biāo)準(zhǔn)品OD值如下：
待測(cè)樣本為腦組織K1、M1（為隨機(jī)編號(hào)），選擇不同的稀釋倍數(shù)做預(yù)實(shí)驗(yàn)，其相應(yīng)的OD如下：
通過標(biāo)準(zhǔn)品的OD及濃度值，運(yùn)用Curve Expert 1.4 軟件，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下：
將不同稀釋倍數(shù)的樣本OD代入公式，即可得到相應(yīng)的待測(cè)樣本的濃度。（對(duì)于有稀釋倍數(shù)的，需要乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）。
選擇使待測(cè)樣本濃度處于曲線陡峭處，針對(duì)Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit檢測(cè)腦組織，可考慮原液檢測(cè)。
4、預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本合適的稀釋倍數(shù)，下面進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，排版如下，注意做好標(biāo)識(shí)，正式實(shí)驗(yàn)操作步驟請(qǐng)參考相應(yīng)的說明書。
（注意：競(jìng)爭(zhēng)法的稍有不同，需嚴(yán)格按照說明書操作）
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