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細(xì)胞培養(yǎng)

一、項(xiàng)目介紹

　　細(xì)胞 (cell)是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位，已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，因此，對(duì)細(xì)胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關(guān)鍵。以細(xì)胞為研究對(duì)象，從細(xì)胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個(gè)層次，研究細(xì)胞和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細(xì)胞的生活史和各種生命活動(dòng)規(guī)律頗具意義。

二、樣品保存運(yùn)輸（寄送細(xì)胞時(shí)請(qǐng)下載資料中心樣品寄送信息單《細(xì)胞送樣單》并填寫好發(fā)送給平臺(tái)助理）

　　1、活細(xì)胞運(yùn)輸方法

　　請(qǐng)用如圖所示不透氣培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞匯合度達(dá)到70% 左右時(shí)，灌滿新鮮培養(yǎng)基至接近瓶口處，擰緊瓶蓋，封口膜進(jìn)一步封住瓶口。瓶身上做好標(biāo)記(細(xì)胞名稱，培養(yǎng)基，日期等)。打包時(shí)必需做防震處理。常溫寄送。

　　2、凍存細(xì)胞運(yùn)輸方法

　　一定要保證干冰充足(2-3天寄送時(shí)間，8-10kg干冰較充足)，凍存管確保被干冰完全覆蓋。切勿凍融。勿將水冰混入干冰件中。

　　3、流式樣本接收注意事項(xiàng)

　　①細(xì)胞凋亡

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光，一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注，否則按照無熒光處理。如果因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi)，我方概不負(fù)責(zé)，也不接受退單。

　　②細(xì)胞周期

　　周期需要細(xì)胞量比較多，6 孔板送樣要求匯合度在70%以上，但不能超過90%。外地樣品，需用預(yù)冷的70% 乙醇固定過夜后（貼壁細(xì)胞需要消化后進(jìn)行固定），離心棄固定液，加1ml PBS重懸，封口膜封好，4℃運(yùn)輸寄到實(shí)驗(yàn)室。

　　③流式JC-1

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽性對(duì)照。如果細(xì)胞帶紅光或綠光，不能檢測(cè)。

　　④流式ROS

　　需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個(gè)空白孔，做陰性和陽性對(duì)照。如果細(xì)胞帶綠光，不能檢測(cè)。

　　⑤細(xì)胞表抗

　　提前確定公司是否有相應(yīng)流式抗體(組化抗體不可用)，其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。

　　⑥流式三標(biāo)

　　提前告知樣本具體數(shù)量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內(nèi)染色至少需要1.5 mL，表抗需要約1 ml)，注意防止凝血，4℃保存運(yùn)輸。血樣4℃保存最多只能存放一周，時(shí)間越久實(shí)驗(yàn)結(jié)果越差。取血后，需盡快寄到實(shí)驗(yàn)室;取脾臟時(shí)盡量將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，直接在實(shí)驗(yàn)室取材后開始實(shí)驗(yàn)，若不能將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室，取材(整個(gè)脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中，4℃保存，提細(xì)胞必須在取材后6 小時(shí)以內(nèi)完成，注意有些檢測(cè)指標(biāo)(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。

　　4、質(zhì)粒、RNA類、病毒類

　　質(zhì)粒載體、miRNA、siRNA等-20℃寄送。

　　慢病毒：-80℃保存、充足純干冰寄送。

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