生化試劑盒
- 醇酰基轉移酶（AAT）活性測定試劑盒-可見分光光度法
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恒遠生物生化試劑盒應用領域廣泛，涉及酶類、氧化應激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標儀，分光光度計和熒光酶標儀。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高效專業的生化代測服務和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些保證了我們向您提供的最專業最優質的服務。
| 中文名稱 |
醇酰基轉移酶（AAT）活性測定試劑盒 |
| 規格 | 24樣 |
| 貨號 |
L-770-SH |
| 價格 | ￥2000 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細胞裂解液、細胞培養上清液等 |
| 檢測范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測方法 |
可見分光光度法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業務員獲取 |
| 文獻 | 咨詢我司業務員獲取 |
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種酰基化和去酰基化反應，在基因表達、代謝和信號傳導中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
AAT測定操作：
1、分光光度計預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入22.5mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1.25mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管。△A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計算公式：
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（
×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（
×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細胞數量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（
×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A
：TNB消光系數，13600L/mol/cm；V反總：反應總體積，1mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，15 min。
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