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生化試劑盒

脂肪酶(LPS)試劑盒- 微量法: 恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀，分光光度計和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測服務(wù)和實驗技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)

產(chǎn)品詳情相關(guān)產(chǎn)品

中文名稱	脂肪酶(LPS)試劑盒
規(guī)格	96樣
貨號	L-723-SH
價格	￥600
樣本類型	血清，血漿，組織勻漿，細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍	詳見說明書
檢測方法	微量法
貨期	3-5天
說明書	咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn)	咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

測定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。

試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體10 μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體: 直接檢測。

LPS測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。

3. 在1.5mL EP管中依次加入下列試劑

試劑名稱（μL）	空白管	測定管
蒸餾水	150
樣本		50
試劑一	300	300

試劑二

100

37℃振蕩反應(yīng)10 min

試劑三

800

37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液

試劑名稱（μL）	空白管	測定管	標(biāo)準(zhǔn)管
上清液	400	400
標(biāo)準(zhǔn)品			400
試劑四	100	100	100

37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

LPS活性計算公式：

1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W

（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義：37℃中每10⁴個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量

2. 血清等液體LPS活性

活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]

C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，10 min。

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